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液相色谱柱的再生处理技巧

时间: 2018-11-01 16:27 浏览次数: 来源:赛默飞世尔液质联用

  当液相色谱柱长时间使用时,会出现分离度降低,理论塔板数降低,塔效降低的现象,适当的处理可以恢复塔效。但并非所有列都可以反冲,最好问生产者。如果您不理解它,请尝试以下方法。

  常规处理:每次使用后用硅胶,氧化铝,极性键合相色谱柱,用低流速的长时间二氯甲烷或正己烷溶剂冲洗;键合相硅胶柱,离子交换色谱柱和凝胶柱首先用蒸馏水冲洗,用甲醇冲洗,然后用甲醇和蒸馏水的溶液以一定比例冲洗过夜。

  使用一段时间后柱效降低的柱可以如下再生。再生处理包括活化(右→左)和纯化(左→右)。

  按下列顺序洗涤硅胶,氧化铝和极性键合相柱:三甲基戊烷或己烷 - 三氯乙烷 - 乙酸乙酯 - 丙酮 - 乙醇 - 水。

  粘结相硅胶柱:蒸馏水 - 甲醇(在洗涤过程中可加入少量二甲基甲酰胺)。

  离子交换树脂柱:高浓度的NaCl溶液(1-2molL的NaCl溶液)可以再生大部分树脂,少量与树脂紧密结合的物质可以用低浓度碱溶液(如0.1molL)洗涤NaOH溶液)。有机物被吸附在固定相中并用低pH缓冲液冲洗。碱性有机物用高pH缓冲液冲洗,然后用蒸馏水 - 甲醇 - 二氯甲烷 - 甲醇 - 蒸馏水冲洗。

  凝胶柱:由于凝胶柱根据待分离物质的分子量分离,因此通常用稀氢氧化钠或非离子型洗涤剂(0.2%-1%NP-40或Lubrol)冲洗。去除大部分绑定的材料。如果仍然无法去除某些污染物,可以通过用24%或30%乙腈冲洗过夜来除去疏水蛋白。亲水性蛋白质可以用30%-50%的乙酸除去,并通过用蛋白水解酶处理而分解。然后用蒸馏水,甲醇 - 蒸馏水冲洗凝胶中残留的痕量胃蛋白酶。

  污染柱的处理:由于强烈的材料污染,流动相或样品中的不溶物质沉积在柱头上。可以通过以下方法洗涤:除去脂质,可以用四氢呋喃,乙腈或甲醇洗涤;去除蛋白质可以是乙腈,丙醇和1%梯度洗脱%三氯乙酸;一些高疏水性化合物可用乙腈或甲醇洗脱,同时反复注入100-200ml四氢呋喃。

  柱头处理:对于柱头严重污染且使用溶剂冲洗无效柱的情况,仅打开柱以移除柱顶部的填料。重新安装不锈钢烧结过滤器,检查柱床,常见凹坑或污染的颜色。填料,去除不规则的床层和有色填料,使床白色和完全水平,然后使用甲醇作为糊状填料匀浆,并将糊状填料匀浆粘贴在柱上,通过重力从匀浆中除去甲醇。重复液体直至填料水平。

  色谱柱的储存:首先,必须在储存前清洗色谱柱。色谱柱不能储存在水或含水溶剂中,否则会导致微生物生长。液相色谱生产厂家,极性柱可以用合适的溶剂如二氯甲烷洗涤;键合相柱用甲醇洗涤;阴离子交换柱用0.002%氯己定缓冲液洗涤,阳离子交换柱用0.005%硫柳汞缓冲液洗涤;用0.02%叠氮化钠或20%乙醇缓冲凝胶柱。然后密封柱的末端以防止溶剂蒸发以干燥柱并引起柱结构的几何变化。

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