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液相色谱基本常识说明以及保护柱相关使用介绍

时间: 2019-05-01 04:37 浏览次数: 来源:赛默飞世尔液质联用

色谱大家应该都不陌生,这是很多行业都会使用到的分类技术。今天小编就来和大家聊聊液相色谱的相关话题。关于液相色谱我们又有哪些应该知道的基本常识呢?高效液相色谱柱前保护柱应该如何使用?感兴趣的各位不要错过。以下关于“液相色谱基本常识说明以及保护柱相关使用介绍”的介绍。



【液相色谱的基本知识】


什么是胶囊色谱?


胶囊色谱(MicellarChromatography,MC)又称拟相液相色谱或假相液相色谱(PseudophaseLC),是一种新型的液相色谱技术。



特点:应用含有高于临界胶囊(或称胶束,微胞等)浓度的表面活性剂溶液作为流动相。所谓“胶囊”就是表面活性剂溶液的浓度超过其临界胶囊浓度(CriticalMicelleConcentration,CMC)时形成的分子聚合体。


通常每只胶囊由n个(一般为25~160个)表面活性剂单体分子组成,其形状为球形或椭圆球形。在CMC值以上的一个较大浓度范围内,胶囊溶液的某些物理性质(如表面张力、电导等等)以及胶囊本身的大小是不变的。


构成胶囊的分子单体与溶液中自由的表面活性剂的分子单体之间存在着迅速的动态平衡。通常有正相与反相两种胶囊溶液。改变胶囊的类型、浓度、电荷性质等对被分离组分的色谱行为、淋洗次序以及分离效果均有较大影响。


胶囊色谱就是充分运用了被分离组分和胶囊之间存在的静电作用、疏水作用、增溶作用和空间位阻作用以及其综合性的协同作用可获得一般液相色谱所不能达到的分离效果。适用于化学结构类似、性质差别细微的组分的分离和分析,是一种安全、无毒、经济的优越技术。


高效液相色谱法(RP-HPLC)测定异构颗粒酒花中的异α-酸


利用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)研究异构颗粒酒花中异α-酸的测定方法。结果表明:当检测波长270nm、流动相为甲醇:水:磷酸(85%):EDTA(ethylenediaminetetraaceticacid)二钠盐(0.2mol/L)(770:210:5:1)、流速为1.0ml/min时,方法的精密度为1.09%,外加标回收率91.4%~97.1%之间。


RP-HPLC的色谱柱为EC250/4Nuclesoil,100-5C18(4.0×250nm,5μm),保护柱为CC8/4Nuclesoil100-5C18。该方法可以简便、准确地测定异构颗粒酒花中异α-酸含量。


在使用之前需要进行水分的标定工作,把同一样本分别在标准测定仪和本测定仪同时进行比对测量,确定水分和电阻的关系,然后再通过键盘把对应关系写入E2PROM中的相应单元中保存起来,形成标准的测量曲线或数据表格。同时考虑到温度的影响,必须加上温度补偿系数以进行修正。


在实际测量时,把当前的测量值与这些标准值进行比较,就可以实现水分的测量。根据现代光谱仪器的工作原理,光谱仪可以分为两大类:经典光谱仪和新型光谱仪.光学多道分析仪OMA(OpticalMulti-channelAnalyzer)是近十几年出现的采用光子探测器(CCD)和计算机控制的新型光谱分析仪器。


它集信息采集,处理,存储诸功能于一体.由于OMA不再使用感光乳胶,避免和省去了暗室处理以及之后的一系列繁琐处理,测量工作,使传统的光谱技术发生了根本的改变,大大改善了工作条件,提高了工作效率;


【高效液相色谱柱前保护柱具体怎么用】


高效液相色谱柱前保护柱具体怎么用?


使用时应该用对应的保护柱,如C18柱用C18的保护柱,次使用时先冲洗干净保护柱,再连接到柱子上,保护柱的填料和柱子一样,所以也有一定的分离作用,但是会增加死体积。保护柱一般不会损坏色谱柱,柱子损坏先看是不是你使用不当造成的,例如C18柱不宜用PH大于7的流动相和纯水系流动相。



次使用前,先处理一下。我们一般是用65%的乙腈/水溶液在0.1-0.5ml/min低速的情况下冲20min,这一过程别接检测器。然后,再渐渐将流速调至1ml/min继续冲2-8小时。


平时使用的时候,注意色谱柱适用的PH值范围、水相的比例(长时间使用水相比例高的流动相会损伤ODS柱)。在使用含有缓冲盐的流动相时,更换前要注意用含水量较多的甲醇过渡,使用完毕后也要含水量较多的甲醇过渡冲洗。


要提高液相色谱的效率可从以下几方面入手:


(1)降低移动相的流速,但会使分析时间。


(2)减少固定相的量,但色谱柱中样品的负载量也随之减小。


(3)减小固定相的颗粒度,但不能过分,过分后色谱柱的渗透率也会减小。


(4)选用低粘度的移动相,以利于快速传质,但却不利于多组份分析。


(5)适当提高柱温,可降低移动相的粘度,但柱效和分离度也随之降低。


(6)尽量减小停滞移动相的体积,但却加快了移动相的流速。


为什么高效液相色谱柱管较短,而气象色谱柱管较长?


得从气相色谱柱和高效液相色谱柱的填料说起。高效液相色谱柱采用的填料粒径很小,常规5-20um,填料还有涂层、键合物等,这样物质在经过色谱柱的时候分配的次数就相当多了。


气相色谱柱的填料粒径较大,或是无填料,与液相色谱柱比较起来的话,气相的色谱柱单位长度的理论塔板数要远远低于液相,为了达到比较理想的分离效果,要求理论塔板数要达到一定的数量,因此气相的色谱柱一般都比高效液相的色谱柱长得多。


以上关于“液相色谱的基本知识”和“高效液相色谱柱前保护柱具体怎么用”的介绍,希望能让您了解“液相色谱基本常识说明以及保护柱相关使用介绍”带来帮助。

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